研究成果（平成23年度）

《研究課題コ−ド》 1111AN001

《課題名》
	藻類由来の有機炭素濃度の算出手法の開発（特異的プライマーを用いて） Development of a technique for calculating algal-derived organic carbon level in lake
《区分名》 AN 新発想
《担当者》
	○冨岡典子（地域環境研究センター）,今井章雄,小松一弘,高津文人
《キ−ワ−ド》
	定量PCR,粒子状有機炭素濃度,富栄養湖沼 real-time PCR, POC, eutrophic lake
《目的》
	霞ヶ浦などの富栄養湖沼では、季節的に藻類濃度が異常に高くなる事があり、有機炭素濃度の上昇や、上水の利用障害など大きな問題となっている。しかしながら、有機炭素濃度と異常増殖藻類濃度との関連はいまだ明らかでなく、有機炭素濃度上昇の原因となる藻類を特定することは困難であった。本研究では培養株を用いて特定藻類のrDNA濃度と有機炭素濃度の換算計数を算出し、藻類由来の有機物負荷を算定することを目標とする。
《内容及び成果》
	霞ヶ浦データベースより特定真核藻類が優占している試料を特定し、真核藻類の18S rDNAについてクローニングを行い、優占藻類のDNAシークエンスを取得した。併せて、DNAデータベースから霞ヶ浦で優占している藻類種の18S rDNAシークエンスを取得し、これらに基づいて特定藻類のプライマーの作成を行った。次に作成したプライマーの特異性の検討を行い、使用可能なプライマーセットを選択した。得られたプライマーを用いて環境サンプルにおける各藻類の18S rDNA濃度の測定を実施した。併せて、生物保存施設から入手した真核藻類試料の18S rDNA濃度及び懸濁態有機物（POC）の測定を行った。これらのデータに基づいて、各藻類の18S rDNA濃度とPOCとの換算係数を算出し、18S rDNA濃度から算出したPOC濃度ついて検証を行った。その結果、作成したプライマーによって霞ヶ浦のStephanodiscus hantzschii, Actinocyclus curvatulus, Cryptomonas sp. の18S rDNAを定量的に増幅することが可能であった。一方、Aulacoseira spp.については、霞ヶ浦データベースと18S rDNAの値が一致せず、今後再検討が必要であることが解った。今回得られたプライマーによって検出された18S rDNA濃度に基づいて、POC濃度を算出した結果、実測値と概ね傾向は一致した。今後、さらなるプライマーの作成を実施する事により、優占藻類の正確な存在量の把握と有機物負荷への影響が明らかになると期待される。
《期間》　平成23〜平成23年度（2011〜2011年度）
《備考》